Comparación de métodos de extracción de ADN en tejidos parafinados y utilidad para amplificación por PCR / Comparison of DNA extraction methods from formalin-fixed paraffin sections for RCP amplification

Los tejidos fijados en formol e incluidos en parafina son una fuente de material para hallazgos moleculares en el ámbito clínico y científico, demostrándose que el ADN extraído de éstos, es adecuado para amplificación a través de la reacción en cadena de la polimerasa (RCP). En este estudio, se ensayaron tres métodos de extracción de ADN en tejidos incluidos en parafina, con el objetivo de comparar la eficiencia de estos para obtener ADN adecuado, además se analizó su utilidad en amplificación por RCP. Se emplearon tres muestras, correspondientes a una biopsia de pulmón, legrado endometrial y ganglio linfático, todas fijadas en formaldehido al 10% e incluidas en parafina. Utilizándose tres métodos diferentes de extracción de ADN (extracción por salting out, método modificado de Sambrook y kit comercial) El ADN obtenido se cuantificó por espectrofotometría, además se realizó electroforesis en gel de agarosa al 1%, para comprobar si el ADN era de buena calidad y se realizó RCP para el exón 3 del gen caveolina 1. Todos los métodos dieron como resultado una buen producto de ADN genómico, observándose mayor cantidad y pureza en los métodos de salting out y kit comercial, asimismo se obtuvo amplificación del producto esperado por estos dos métodos, no hubo buenos resultados con el ADN extraído por el método modificado "Preparation of Genomic DNA from Mouse Tails y Other Small samples, según Sambrook". El ADN obtenido a partir de tejidos FFIP puede ser amplificado por varios métodos, entre estos, la extracción por salting out es útil y con poca toxicidad, permite obtener ADN de buena calidad para amplificación por RCP.

Formalin-fixed and paraffin-embedded tissues are a source of important molecular findings in clinical and scientific, demonstrating that the DNA extracted from these is suitable for amplification by polymerase chain reaction (PCR). In this study, we tested three methods of DNA extraction, in order to compare the efficiency of these DNA for RCP amplification. Three samples were used, corresponding to a lung biopsy, endometrial curettage and lymph node, all fixed in 10% formaldehyde and embedded in paraffin. Three different methods were used for DNA extraction (extraction by salting out, modified Sambrook method and commercial kit) The DNA obtained was analyzed by spectrophotometry, and gel electrophoresis was performed in 1% agarose to check if the DNA was amplifiable. PCR was performed for exon 3 of caveolin-1 gene. All methods resulted in a good product of genomic DNA, obtaining more quality and purity in the salting out and commercial kit methods. Also, we obtained amplification of the product by these two methods, without favorable results with the DNA extracted by the modified "Preparation of Genomic DNA from Mouse Tails and Other Small samples, according to Sambrook et al." The DNA obtained from FFPE can be amplified by several methods, among them, salting out extraction is an easy, effective and low toxicity for obtaining good quality DNA for PCR amplification.

Evaluation of local immune response to Fasciola hepatica experimental infection in the liver and hepatic lymph nodes of goats immunized with Sm14 vaccine antigen

Protection against Fasciola hepatica in goats immunized with a synthetic recombinant antigen from Schistosoma mansoni fatty acid-binding protein 14 (rSm14) was investigated by assessing worm burdens, serum levels of hepatic enzymes, faecal egg count and hepatic damage, which was evaluated using gross and microscopic morphometric observation. The nature of the local immune response was assessed by examining the distribution of CD2+, CD4+, CD8+ and γ´+ T lymphocytes along with IgG+, IL-4+ and IFN-γ+ cells in the liver and hepatic lymph nodes (HLN). The goats used consisted of group 1 (unimmunized and uninfected), group 2 [infected control - immunized with Quillaia A (Quil A)] and group 3 (immunized with rSm14 in Quil A and infected), each containing seven animals. Immunization with rSm14 in Quil A adjuvant induced a reduction in gross hepatic lesions of 56.6 percent (p < 0.001) and reduced hepatic and HLN infiltration of CD2+, CD4+, CD8+ and γ´+ T lymphocytes as well as IL-4+ and IFN-γ+ cells (p < 0.05). This is the first report of caprine immunization against F. hepatica using a complete rSm14 molecule derived from S. mansoni. Immunization reduced hepatic damage and local inflammatory infiltration into the liver and HLN. However, considering that Quil A is not the preferential/first choice adjuvant for Sm14 immunization, further studies will be undertaken using the monophosphoryl lipid A-based family of adjuvants during clinical trials to facilitate anti-Fasciolavaccine development.

Esclerosis sistémica juvenil forma cutánea difusa

Se presenta un caso de esclerosis sistémica juvenil variedad cutánea difusa, en una adolescente de 16 años de edad, quien consultó por endurecimiento generalizado de la piel, fenómeno de Raynauld y disnea de grandes esfuerzos de un año de evolución

Hipersensibilidad retardada cutánea en pacientes con alergia asociada o no a enfermedades malignas / Delayed skin hypersensitivity in patients with allergy associated or not with malignant diseases

Se estudia la inmunidad celular con pruebas de hipersensibilidad retardada cutánea (HRC) a antígenos de memorias comunes y al dinitroclorobenceno (DNCB) en 204 pacientes presuntos cancerosos, los cuales fueron entrevistados para establecer los diagnósticos clínicos de alergía. Se observó mayor depresión inmune en individuos con cáncer en relación con los no cancerosos, independientemente de que fueran o no alérgicos. En el grupo libre de cáncer el mayor número de sujetos con disminución de ambas reactividades se registró entre los alérgicos. Las diferencias no resultaron ser estadísticamente significativas (X*). Los resultados alcanzados serán revisados en una muestra mayor de pacientes

Infarto del miocardio y tendinitis aquiliana como manifestaciones de hipercolesterolemia familiar / Myocardial infarction and Achilles tendinitis as manifestations of familial hypercholesterolemia

La hipercolesterolemia familiar (HF) es un trastorno genetico caracterizado por disminucion de los receptores para LDL colesterol que se manifiesta por aumento de los niveles plasmaticos de LDL, enfermedad coronaria (EC) prematura y manifestaciones osteoarticulares como xantomas tendinosos y artritis. Se informa el caso de un hombre de 30 anos, sin antecedentes reumatologicos ni cardiovasculares, quien concomitantemente presento infarto agudo del miocardio (IM) y tendinitis aguda del Aquiles. Las caracteristicas clinicas y el patron lipidico fueron compatibles con HF (hiperlipoproteinemia IIa). Se discuten las caracteristicas clinicas del paciente y las manifestaciones reumatologicas de las hiperlipoproteinemias

Familial hypercholesterolemia (FH) is a genetic disorder characterized by a decrease in LDL cholesterol receptors; patents exhibit increased plasmatic LDL levels, early coronary artery disease and osteoarticular manifestations such as tendinous xanthomata and arthritis. We report the case of a thirty year-old man wlth no cardiovascular or rheumatologic history who presented with concomitant acute myocardial Jnfarctlon and acute Achilles'' tendinitis. Clinical features and lipid work-up were consistent with FH (Hyperlipoproteinemia IIa).